http://hdl.handle.net/10854/2304 Fri, 17 Apr 2026 07:57:20 GMT 2026-04-17T07:57:20Z http://hdl.handle.net/10854/180698 Anàlisi exploratori del paper del marcador biològic PRODH en la resposta immunitària innata de les cèl·lules epitelials de les vies respiratòries a l’estímul amb l’àcar de la pols Nogué Llurba, Xènia Un dels principals reptes en les malalties al·lèrgiques, com la rinitis, és entendre’n la complexitat mitjançant enfocaments que permetin identificar els mecanismes patològics i desenvolupar una medicina personalitzada. Tot i que sovint es subestima la rinitis al·lèrgica (RA), els estudis epidemiològics indiquen un augment tant en el nombre de pacients com en la gravetat de la malaltia. La inflamació al·lèrgica de les vies respiratòries no només és conseqüència de l’increment de la resposta adaptativa Th2, sinó que també està fortament influenciada per la resposta local de les cèl·lules epitelials nasals (CEN) que constitueixen la barrera epitelial (BE) i tenen un paper essencial en la primera línia de defensa i en la regulació de la resposta immune. L’alteració de la BE ha estat documentada en malalties com la RA. Aquesta alteració modifica la secreció dels factors de creixement i molècules funcionals com TSLP i CCL20 les quals estan involucrades en la inducció d’una resposta Th2. Estudis recents in vitro de la resposta immunobiològica de l’epiteli nasal davant de factors ambientals com els àcars de la pols, suggereixen que PRODH podria afavorir la secreció tant de TSLP com de CCL20. Establir si PRODH modifica la resposta inflamatòria podria contribuir al coneixement dels mecanismes fisiopatològics de la RA. L’objectiu principal d’aquest estudi va ser silenciar l’expressió de PRODH en cèl·lules epitelials nasals de pacients control i avaluar-ne la resposta immunitària innata davant l’estímul amb àcars de la pols. Els resultats ajudaran a comprendre els mecanismes locals que contribueixen a la inflamació i a identificar biomarcadors, cosa que permetria optimitzar el tractament i el control de la rinitis al·lèrgica.; One of the main challenges in allergic diseases, such as rhinitis, is understanding their complexity through approaches that can identify the pathological mechanisms, allowing us to develop personalized medicine. Although allergic rhinitis (AR) is frequently underestimated, epidemiological studies indicate an increase in the number of patients and the severity of the condition. Allergic inflammation of the airway not only results from the increase in the adaptive Th2 response but is also highly influenced by the local response of the nasal epithelial cells (NEC) that make up the epithelial barrier (EB), which has an essential role in the first line of defense and regulation of the immune response. The disruption of BE has been documented in diseases such as RA. This alteration modifies the secretion of growth factors and functional molecules such as TSLP and CCL20, which are involved in inducing a Th2 response. Recent in vitro studies of the immunobiological response of the nasal epithelium to environmental factors such as dust mites suggest that PRODH may favor the secretion of both TSLP and CCL20. Establishing whether PRODH modifies the inflammatory response could contribute to understanding the pathophysiological mechanisms of RA. The primary objective of this study was to suppress the expression of PRODH in nasal epithelial cells of healthy subjects and assess their innate immune response to dust mite stimuli. The results will help elucidate the local mechanisms that contribute to inflammation and identify biomarkers, enabling the optimization of treatment and control of allergic rhinitis. Curs 2024-2025 Sun, 01 Jun 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10854/180698 2025-06-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10854/180695 Estratègia per a la clarificació i purificació d’una proteïna recombinant produïda en llevat Tintó Gueldos, Marina Aquest projecte se centra en el desenvolupament d’una vacuna més eficaç i segura contra el virus X, un patogen extremadament virulent que afecta greument la indústria porcina, provocant pèrdues econòmiques importants. L’objectiu principal és purificar una proteïna recombinant immunògena del virus X, utilitzant el llevat Komagataella phaffi com a sistema d’expressió per formar una entitat supramolecular que serveixi de base per a la vacuna. El procés habitual es basa en el cultiu del llevat en un fermentador en discontinu alimentat, amb inducció per metanol sota el control del promotor AOX1 i l’ús d’un vector d’expressió dissenyat per a produir la proteïna de la càpsida viral. Un cop sintetitzada intracel·lularment, la proteïna es recupera mitjançant disrupció cel·lular, clarificació i purificació per cromatografia d’afinitat. Davant les limitacions del procés convencional (terbolesa elevada i el rendiments baixos), s’ha avaluat una nova estratègia de purificació, la tècnica C, basada en l’ús de resina cromatogràfica no empaquetada combinada amb filtració tangencial per integrar la clarificació i captura en un sol pas. Per aquest motiu, es duen a terme diverses proves de concepte inicial per optimitzar-ne les condicions operatives: assajos de condicions de disrupció, diferents condicions de preparació de la resina i incubació amb la mostra i estratègies de clarificació i captura mitjançant un sistema de filtració tangencial i diafiltració. Els resultats mostren que la disrupció és més eficient en la “condició 8” (una sola passada); que la millor captura s’obté amb la resina Nuvia IMAC a raó de 30ml de mostra/ml de resina i incubació O/N a temperatura ambient; i que la TFF amb una membrana PESU de 0,2μm permet recuperar la proteïna amb rendiments comparables al procés convencional, fins i tot en mostres de terbolesa elevada. En conclusió, tot i que aquesta estratègia encara presenta alguns reptes tècnics, es presenta com una alternativa prometedora al mètode de purificació convencional, sent més segura i econòmica, i posant les bases per a futurs ajustos que permetin incrementar el rendiment i puresa de la proteïna Y.; This project focuses on the development of a more effective and safer vaccine against virus X, an extremely virulent pathogen that severely impacts the swine industry, leading to significant economic losses. The main objective is to purify an immunogenic recombinant protein from virus X using the yeast Komagataella phaffii as an expression system, to form a supramolecular entity to serve as the vaccine basis. The standard production process relies on fed-batch cultivation of the yeast in a bioreactor, with methanol induction under the control of the AOX1 promoter and the use of an expression vector designed to produce the viral capsid protein. Once synthesized intracellularly, the protein is recovered through cell disruption, clarification, and purification by affinity chromatography. Given the limitations of the conventional process (such as high turbidity and low yields), a novel purification strategy— referred to as technique C—has been evaluated. This approach is based on the use of unpacked chromatographic resin combined with tangential flow filtration (TFF), allowing clarification and capture to be integrated into a single step. To optimize the operating conditions, several proof-of concept experiments were conducted: tests of cell disruption conditions, resin preparation and incubation parameters, and clarification/capture strategies using TFF and diafiltration systems. The results show that disruption is most efficient under "condition 8" (a single pass); that the best capture is achieved using Nuvia IMAC resin at a ratio of 30 mL sample per mL of resin with overnight incubation at room temperature; and that TFF with a 0.2 µm PESU membrane allows recovery of the protein with yields comparable to the conventional process, even with high turbidity samples. In conclusion, although this strategy still presents some technical challenges, it emerges as a promising alternative to traditional purification methods—safer, more cost-effective, and laying the groundwork for future optimization to improve yield and purity of protein Y. Curs 2024-2025 Sun, 01 Jun 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10854/180695 2025-06-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10854/180694 Estudi del paper de la micròglia i l’acumulació de gotes lipídiques després d’un ictus isquèmic en ratolins Sunyer Claverí, Júlia L’ictus isquèmic desencadena una resposta neuroinflamatòria en què la micròglia exerceix un paper central. Tot i que l’autofàgia és un procés essencial per al manteniment de l’homeòstasi cel·lular, el seu paper específic en la micròglia post-ictus continua sent poc conegut. Aquest estudi investiga com la disfunció autofàgica microglial, induïda mitjançant la deleció específica del gen Atg5, afecta la resposta cerebral després d’un ictus isquèmic experimental. S’ha utilitzat un model murí amb deleció condicional de Atg5 en micròglia mitjançant el sistema Cre-loxP. Es van analitzar diversos paràmetres a les 24, 48 hores i 4 dies post-ictus: volum d’infart, dèficit neurològic, acumulació de gotes lipídiques (LDs) i estat metabòlic cel·lular. Els resultats mostren que, malgrat no observar-se diferències en la mida de l’infart ni en les funcions neurològiques en fase aguda, els ratolins deficients d’Atg5 presenten una acumulació significativa de LDs, una morfologia microglial reactiva i una possible reprogramació metabòlica cap a la glucòlisi. Aquestes alteracions suggereixen que la disfunció del procés d’autofàgia redueix la capacitat resolutiva de la micròglia, comprometent la seva funcionalitat i potencialment afavorint una resposta inflamatòria disfuncional. Aquest treball aporta noves evidències sobre el paper clau de l’autofàgia microglial en la regulació de la inflamació cerebral i en el control del metabolisme lipídic després d’un ictus.; Ischemic stroke triggers a neuroinflammatory response in which microglia play a central role. Although autophagy is essential for maintaining cellular homeostasis, its specific function in post-stroke microglia remains poorly understood. This study investigates how microglial autophagy dysfunction, induced by targeted deletion of the Atg5 gene, affects the brain response following experimental ischemic stroke. A conditional Atg5 knockout mouse model was used, employing the Cre-loxP system. Several parameters were analyzed at 24, 48 hours and 4 days post-stroke: infarct volume, neurological deficit, lipid droplet (LD) accumulation, and cellular metabolic state. The results show that, despite no differences in infarct size or acute neurological function, Atg5-deficient mice exhibit significant LD accumulation, a reactive microglial morphology, and a possible metabolic shift toward glycolysis. These alterations suggest that impaired autophagy reduces microglial resolution capacity, compromising their functionality and potentially promoting a dysfunctional inflammatory response. This study provides new evidence for the crucial role of microglial autophagy in regulating brain inflammation and lipid metabolism after stroke. Curs 2024-2025 Sun, 01 Jun 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10854/180694 2025-06-01T00:00:00Z http://hdl.handle.net/10854/180682 Simulacions moleculars de l’impacte del triflourometa en la conformació de la regió C-terminal de diverses variants de la proteïna Reelina Tomas Moncunill, Marc El present treball de fi de grau explora l’impacte del trifluoroetanol (TFE) sobre la dinàmica conformacional de l’extrem C-terminal de la proteïna Reelina, que te un especial interès per la seva implicació en els processos neurodegeneratius associats a la malaltia d’Alzheimer. En aquest treball, hem explorat l’efecte diferencial de l’ús de trifluoroeta-nol (TFE), conegut per estabilitzar les hèlix alfa, en l’estabilitat de la regió C-terminal de la Reelina per a cinc variants: el tipus salvatge (WT) i quatre mutants (H3447R, H3447K, H3447D i R3446H). L’objectiu era discernir la resposta en la flexibilitat conformacional a les diferents concentracions de TFE d’una variant en particular, H3447R, coneguda com a RELN-COLBOS, i que ha estat recent ment proposada com a rellevant, pel seu equilibri distintiu entre flexibilitat i estabilitat que podria influir en la seva interacció amb els glicosaminoglicans (GAGs) i, per tant, en la seva funcionalitat terapèutica. Per a fer-ho, hem realitzat simulacions moleculars mitjançant dinàmica molecular de sistemes composats per la regió C-terminal de la Reelina en les deferents variants i diferents concentracions de TFE. L’anàlisi de les dinàmiques moleculars ha inclòs l’estudi de les fluctuacions dels diferents residus (RMSF) i ` la compactació global (radi de gir), demostrant que la presencia de TFE afavoreix la formació d’estructures d’ ´ alfa-hèlix i modula la dinàmica del fragment ` C-terminal. Tot i les limitacions d’escala i condicions experimentals com la concentració elevada de TFE en comparació o amb entorns fisiològics reals, els resultats proporcionen evidencies pertinents sobre la influencia del solvent en la conformació proteica i obren noves línies d’investigació per a futures aplicacions ´ terapèutiques. Aquest treball compleix, en termes parcials, els objectius plantejats i ressalta la importància de continuar explorant altres hipòtesis relacionades amb la funcionalitat de la Reelina, contribuint així a la recerca de nous enfocaments per al tractament de la malaltia d’Alzheimer. Curs 2024-2025 Sun, 01 Jun 2025 00:00:00 GMT http://hdl.handle.net/10854/180682 2025-06-01T00:00:00Z