Estudios de expresión de miRNA implicados en la reproducción de insectos

Abstract

En insectos, la investigación sobre los miRNAs se ha limitado inicialmente a Drosophila melanogaster, pero hoy en día, a través de nuevos enfoques experimentales y de la bioinformática, miles de miRNAs se han identificado en especies holometábolas y hemimetábolas. Entre los representantes hemimetábolos, se secuenció una biblioteca de pequeños RNAs de ovarios adultos de la cucaracha Blattella germanica, donde se encontró un miRNA muy abundante, Novel-1. B. germanica es filogenéticamente un insecto basal hemimetábolo con ovarios panoísticos. En este tipo de ovario, todas las células de la línea germinal se desarrollan en oocitos que son responsables de su correcto desarrollo y control de la expresión génica. Novel-1 es el miRNA más abundante en ovarios adultos de B. germanica. Éste miRNA se encuentra también en bases de datos de RNA pequeños de Locusta migratoria y Acyrthosiphon pisum que son insectos hemimetábolos, así como B. germanica. Analizamos el perfil de expresión de Novel-1 por qRT-PCR en los ovarios de hembras adultas y tratamos de analizar posibles mRNA diana para Novel-1 silenciando éste miRNA inyectando un oligonucleótido antisentido. La hipótesis es que los miRNA controlan la expresión de genes en el oocito basal y probablemente nos pueden ayudar a responder preguntas acerca de la regulación de la expresión génica durante la oogénesis en oocitos panoísticos. Los resultados sugieren que este miRNA podría actuar regulando algunos mensajeros que son necesarios al final de la maduración de los oocitos.

In insects, research on miRNAs has been initially limited to Drosophila melanogaster but nowadays, through experimental and bioinformatics approaches, thousands of miRNAs have been identified in holometabolan and hemimetabolan species. Among hemimetabolan representatives, has been recently sequenced one library of small RNAs from adult ovaries of the cockroach Blattella germanica, where an abundant miRNA was found, Novel-1. B. germanica is a phylogenetically basal hemimetabolan insect with panoistic ovaries. In this type of ovary, all germline cells develop into oocytes which are responsible for their proper development and gene expression control. Novel-1 is the most abundant miRNA found in B. germanica adult ovaries. Furthermore, this miRNA has been reported in small RNA databases from Locusta migratoria and Acyrthosiphon pisum which are hemimetabolan insects as well as B. germanica. We analyzed its expression profile by qRT-PCR in adult ovaries of adult females and we tried to analyze potential target for Novel-1 mRNA silencing it injecting an antisense oligonucleotide. The hypothesis is that miRNAs control gene expression in the basal oocyte and probably it can help us to elucidate questions about gene expression during oogenesis in panoistic oocytes. The results suggest that this miRNA might act regulating some messengers that are necessary at the end of the maturation of the oocytes.